بیماری زنبور عسل

(((ازمایشهای بیماری و افات زنبورعسل))))

تشخیص آزمایشگاهی لوک آمریکایی

(American foulbrood)

 عامل بیماری پنی باسیلوس لاروا(paenibacillus larvae ) می باشد

که باکتری گرم مثبت ،متحرک،اسپوردارو مقاوم دربرابر شرایط محیطی می باشد.حساسترین سن ابتلا دوران لاروی بوده ودر زنبوران بالغ هیچ علایمی مشاهده نمی شود در واقع این باکتری در روده میانی لارو جوانه زده وتکثیر می یابد.سپس بتدریج به داخل همولنف نفوذ کرده وبا ایجاد باکتریمی باعث مرگ لارو می شود.وجود بوی تعفن و ترشیدگی وفرورفته وسوراخدار بودن سلولهای حاوی شفیره و همچنین وجود تعدادزیادی سلول خالی در کنار سلولهای حاوی لارو و شفیره سالم از علایم بیماری می باشند.

1.تست چوب کبریت : چوب کبریت را داخل سلول دارای لارو بیمار برده وآنرا هم میزنیم سپس چوب کبریت رابه بالا می کشیم درصورتی که محتویات بیش از2.5 سانتیمتر کش بیاید مشکوک به لوک آمریکایی می شویم (در اثر رشد باکتری محتویات بدن لارو افزایش غلظت می یابد)

2.تست لام مرطوب:که از باقیمانده فلسهای داخل سلولها استفاده کرده و رنگ آمیزی می کنیم می توان از همان محتویات در تست چوب کبریت استفاده کرد و پس از تهیه گسترش رنگ آمیزی نمود  وشکل رویشی یا اسپورباکتری را مشاهده کرد.

3.تست قطره معلق:که برای بررسی حرکت براونی اسپور استفاده می شود.در این روش مقداری از مایعات همگن شده سلولهای مشکوک را روی لامل گذاشته وپس از فیکس کردن با فوشین به مدت30ثانیه رنگ آمیزی می کنیم سپس روی یک لام یک قطره روغن ریخته و لامل را در همان حالت خیس بطور وارونه روی لام می گذاریم.در صورت وجود اسپور در قطرات معلق آب می توان حرکت براونی اسپور را مشاهده کرد.

4.کشت باکتریایی:الف)استفاده از لارو و شفیره:تعدادی لارو و شفیره را بطور استریل ازحجرات خارج کرده ودر هاون می ریزیم بازای هر 20نمونه 20سی سی آب مقطر استریل اضافه کرده و آنها را می کوبیم سپس مایع رویی را با توری صاف می کنیم و مایع باقیمانده را در دور 3000 به مدت15دقیقه سانتریفوژ می کنیم .مایع رویی را دور ریخته ورسوب باقیمانده را به مدت12دقیقه در بن ماری90درجه قرار می دهیم.پس از خنک شدن نیم سی سی ازرسوب را در محیط mygp کشت می دهیم و به مدت 72-18 ساعت انکوبه می کنیم.درصورت رشد باکتری تست کاتالاز انجام می دهیم که کاتالاز آن منفی است.مرحله بعد تهیه گسترش و رنگ آمیزی است.در صورتی که باکتری پس از3-2روز اسپوردار نشد باسیلوس لاروا نیست.

ب)استفاده از موم:مقداری آب مقطراستریل به موم اضافه نموده و آنرا در بشر حرارت می دهیم تا موم حل شود

پس از خنک شدن با پیپت استریل آنرا سوراخ کرده وموم منجمد را کنار می زنیم ومایع آنرا تخلیه می کنیم سپس آنرا در دور3000به مدت15دقیقه سانتریفوژ کرده رسوب موجود در ته باقیمانده را12دقیقه در بن ماری90درجه قرار داده و از آن برای کشت استفاده می کنیم

ج)عسل:1سی سی عسل را به 9سی سی آب مقطر استریل اضافه کرده وپس از حل شدن در دور 3000به مدت15دقیقه سانتریفوژ می کنیم سپس به میزان نیم سی سی از رسوب را در محیط mygpکشت می دهیم

د)گرده:مقداری گرده را در هاون ریخته وکمی آب مقطر استریل اضافه کرده و می کوبیم.بقیه مراحل مثل روشهای قبلی می باشد.

 تشخیص آزمایشگاهی لوک اروپایی

(European foulbrood)

  عامل بیماری استرپتوکوکوس پلوتون بوده که باکتری کوکسی گرم مثبت فاقد حرکت واسپوروحساس در برابر شرایط نامساعد محیطی می باشد.باکتری به محض ورود به روده لارو تکثیر یافته واز غذای روده لارو استفاده کرده واز جذب غذا در بدن لارو جلوگیری می کند ودرواقع با ایجاد فقر غذایی درلارو باعث مرگ آن می شود. در علایم بالینی گاهی بوی ترشیدگی از کندو به مشام می رسد وسرپوش برخی سلولهای حاوی شفیره فرورفته و سوراخدار است وبقایای لاروهای تلف شده در داخل سلولها بصورت فلسی شده مشاهده می شوند ولی در تست چوب کبریت محتویات کش نمی آیند. در مورد لوک اروپایی روشها همانند لوک آمریکایی است ولی مرحله بن ماری حذف شده و از محیط کشت بیلی استفاده می شود و از طرفی برای رشد باکتری نیاز به 10%co2 می باشد.باکتری سخت رشد بوده و در رنگ آمیزی بصورت کوکسیهای گرم مثبت رشته ای دیده می شوند.

 روشهای تشخیص آزمایشگاهی بیماریهای انگلی زنبور عسل

 1.روش تشخیص آزمایشگاهی مایت varroa:

یکی از روشهااستفاده از مایع ظرفشویی و آب داغ می باشد .در این روش حداقل 100زنبور راپس از بیهوش کردن در بشر ریخته وچند قطره مایع ظرفشویی و حدود 100سی سی آب داغ اضافه می کنیم و بشر را به مدت نیم ساعت روی شیکر قرار می دهیم در این صورت سطح چسبندگی مایت با بدن زنبور کاهش یافته و در مایع غوطه ور می شوند و با شمارش تعداد مایتها می توان درصد آلودگی کندو را تعیین کرد .روش دیگر استفاده از اتر برای بیهوش کردن زنبورهاست که در این روش نیز مایتها از بدن زنبور جدا شده و با شمارش آنها می توان درصد آلودگی کندو را مشخص کرد.البته در هر دو روش از زنبورهای بالغ و شفیره های نر می توان استفاده کرد

روش تشخیص آزمایشگاهی مایت acarapis woodi

 در این روش حداقل تعداد 20زنبور را مورد بررسی قرار می دهیم.بدین صورت که ابتدا با اسکالپل سر و دو جفت پاهای قدامی زنبورها را قطع کرده و سپس صفحه کیتینی بین سر و سینه را برش می دهیم تا عضلات در معرض دید قرار گیرند.در صورت آلوده بودن زنبور به این مایت تراشه های تنفسی در زیر لوپ بصورت کدر مشاهده می شوند.سپس عضلات سینه را جدا کرده و آنها را بمدت یک شبانه روز در پتاس 10%قرار می دهیم تا بافتهای نرم حل شده و فقط تراشه ها باقی بمانند.روز بعد تراشه ها را بوسیله پنس یا سوزن خارج کرده و زیر میکروسکوپ مشاهده می کنیم.در صورت آلوده بودن زنبور مایت در داخل تراشه ها مشاهده خواهد شد.

در روش سریعتر از قسمت سینه زنبور برش مورب تهیه کرده روی لام گذاشته و چند قطره پتاس 10% روی آن می ریزیم سپس روی شعله حرارت می دهیم تا پتا س باعث حل شدن بافتهای نرم شود.پس از حل شدن لامل را روی آن قرار داده و با بزرگنمایی x40وجود انگل را در تراشه ها بررسی می کنیم.

روش تشخیص آزمایشگاهی  انگل نوزما (Nosema Apis):

نمونه برداری از زنبورهای بالغ بیمارو بطور راندوم از کندوهای مختلف انجام می گیرد.ساده ترین روش تشخیص این بیماری در آزمایشگاه مشاهده پیش معده و روده قدامی زنبوران مبتلا به بیماری است که در زنبوران سالم این ناحیه قهوه ای روشن بوده ولی در زنبوران بشدت مبتلا پیش معده سفیدرنگ ومتورم است وچین و شکنجهای آن از بین رفته است.روش تشخیص دقیق بیماری مشاهده اسپور نوزما در داخل محتویات روده زنبوران بالغ یا لکه های مدفوع زنبوران مشکوک به بیماری است.روش کار بدین صورت است که با استفاده از پنس روده میانی حداقل 25زنبور بیمار را خارج کرده ودر داخل ظرفی ریخته و مقداری سرم فیزیولوژی یا آب مقطر استریل اضافه می کنیم.سپس آنها را کاملا همگن می سازیم تا محتویات روده ها در آب مقطرحل شوند.سپس قطره ای از این محلول را روی لام قرار داده وروی آن لامل قرار می دهیم و با درشت نماییx40اقدام به مشاهده آنها می کنیم.در صورت آلودگی زنبورها اسپور های نوزما بصورت اجسام تخم مرغی شکلی مشاهده می شوند.در روش دیگر می توان با استفاده از تیغ اسکالپل مقداری از مدفوع روی دریچه پرواز را برداشته ودر آب مقطر استریل حل کردو به روش فوق به مشاهده اسپور پرداخت.برای تعیین درصد آلودگی نمونه ها می توان از لام هموسیتومتر استفاده کرد

بیماریهای قارچی زنبور عسل

 1.بیماری نوزاد گچی (chalk brood disease)

2.بیماری نوزاد سنگی(ston brood disease)

 روش تشخیص آزمایشگاهی بیماری نوزاد گچی:

عامل بیماری اسکوسفورا آپیس بوده (ascosphora apis) وباعث مرگ نوزادان در سن شفیرگی می شود.عامل از طریق گوارشی منتقل شده وبا نفوذ به دیواره روده وارد همولنف می شود سپس به جداره پوست نفوذ کرده ودر اثر رشد قارچ در سطح بدن توده گچی از نوزاد شکل می گیرد.درازمایشگاه نمونه های اخذ شده از این لاروها را در آب مقطر استریل حل کرده و با استفاده ازآنس یا سواپ در سطح محیط سابورو دکستروز آگار کشت می دهیم(به محیط ساخته شده سیکلوهگزامید اضافه می شود)و به مدت 5-3روز در دمای 25درجه سلسیوس انکوبه می کنیم رشد قارچ در محیط بصورت توده ای پنبه ای سفید بوده و با تهیه گسترش آسکهای آسکوسفورا بصورت توده ای مشاهده می شوند.

روش تشخیص آزمایشگاهی بیماری نوزاد سنگی

عوامل بیماری آسپرژیلوس فومیگاتوس و آسپرژیلوس فلاووس می باشند که شفیره ها را درگیر کرده ودر بالغین نیز علایمی ایجاد می کند نوزادان در اثر رشد قارچ در سطح بدن به دیواره سلول چسبیده وبراحتی جدا نمی شوند و نوزادان تلف شده بصورت سنگ شده در جلوی کندو مشاهده می شوند که توده در واقع در اثر رشد قارچ در سطح بدن ایجاد می شود.پس از انتقال نمونه های تلف شده به آزمایشگاه آنها را در آب مقطر استریل یا سرم فیزیولوژی حل کرده و در سطح محیط سابورو دکستروز آگار کشت می دهیم وبه مدت5-3روز در دمای 25درجه سلسیوس انکوبه می کنیم .پس از این مدت توده های قارچی در سطح محیط شکل می گیرند وبا تهیه لام میکروسکوپی به ماهیت قارچ دست میابیم.

http://arm1354.blogfa.com/post-5.aspx